精準(zhǔn)檢測，洞悉生命 - 上海心語生物科技有限公司

（心語檢測(XinYu BioDetect），您的可靠科研伙伴

ELISA試劑盒的典型組成：

一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒通常包含以下組件：

1、預(yù)包被微孔板： 96孔或48孔塑料板，孔內(nèi)已預(yù)先包被好捕獲抗體或抗原（根據(jù)類型而定）。這是反應(yīng)發(fā)生的場所。

2、酶標(biāo)二抗（或酶標(biāo)檢測抗體/抗原）： 根據(jù)ELISA類型，提供辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗（用于間接法或夾心法），或酶標(biāo)抗原（用于競爭法）。

3、標(biāo)準(zhǔn)品： 已知精確濃度的抗原（或抗體）系列梯度溶液。用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中待測物的濃度。

4、檢測抗體（僅夾心法）： 未標(biāo)記的、針對抗原另一表位的抗體。

5、樣品稀釋液： 用于稀釋樣本，使其基質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品和緩沖體系匹配，減少非特異性干擾。

6、洗滌緩沖液： 通常為含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。用于在各步驟之間洗去未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景干擾。洗滌是否是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵！

7、封閉液： 常用牛血清白蛋白或脫脂奶粉溶液。用于在包被后封閉微孔板上未結(jié)合的位點(diǎn)，防止后續(xù)步驟中的非特異性吸附，降低背景。

8、底物溶液：

對于HRP：常用四甲基聯(lián)苯胺或3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺。

對于AP：常用對硝基苯磷酸酯。

9、終止液：

對于HRP-TMB：常用稀硫酸溶液。

對于AP-pNPP：常用氫氧化鈉溶液。用于終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定最終顏色。

10、板封膜： 在孵育步驟中覆蓋微孔板，防止蒸發(fā)和污染。

11、說明書： 詳細(xì)的操作步驟、試劑保存條件、注意事項(xiàng)、預(yù)期結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法等。

樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果），稱重后將組織,剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

6. 樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

人斯鈣素1ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

心語檢測(XinYu BioDetect)   人整合素結(jié)合唾液蛋白(IBSP)試劑盒   英文名：IBSP ELISA Kit心語檢測(XinYu BioDetect)   人自噬相關(guān)蛋白LC3-II（LC3-II）ELISA試劑盒   英文名：LC3-II ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人P62蛋白(P62)ELISAELISA試劑盒   英文名：P62 ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人（Human）游離DNA（cfDNA）ELISAELISA試劑盒   英文名：cfDNA ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人肝素結(jié)合細(xì)胞因子(MDK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒   英文名：MDK ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人角蛋白8(KRT8)酶聯(lián)免疫分析試劑盒   英文名：KRT8 ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人E選擇素（E Selectin）ELISAELISA試劑盒   英文名：E-Selectin ELISA Kit

心語檢測(XinYu BioDetect)   人內(nèi)皮微粒（EMP）ELISA試劑盒   英文名：EMP ELISA Kit