精準(zhǔn)檢測(cè)，洞悉生命 - 上海心語(yǔ)生物科技有限公司

（心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect），您的可靠科研伙伴

ELISA試劑盒的典型組成：

一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒通常包含以下組件：

1、預(yù)包被微孔板： 96孔或48孔塑料板，孔內(nèi)已預(yù)先包被好捕獲抗體或抗原（根據(jù)類型而定）。這是反應(yīng)發(fā)生的場(chǎng)所。

2、酶標(biāo)二抗（或酶標(biāo)檢測(cè)抗體/抗原）： 根據(jù)ELISA類型，提供辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗（用于間接法或夾心法），或酶標(biāo)抗原（用于競(jìng)爭(zhēng)法）。

3、標(biāo)準(zhǔn)品： 已知精確濃度的抗原（或抗體）系列梯度溶液。用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中待測(cè)物的濃度。

4、檢測(cè)抗體（僅夾心法）： 未標(biāo)記的、針對(duì)抗原另一表位的抗體。

5、樣品稀釋液： 用于稀釋樣本，使其基質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)品和緩沖體系匹配，減少非特異性干擾。

6、洗滌緩沖液： 通常為含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。用于在各步驟之間洗去未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景干擾。洗滌是否是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵！

7、封閉液： 常用牛血清白蛋白或脫脂奶粉溶液。用于在包被后封閉微孔板上未結(jié)合的位點(diǎn)，防止后續(xù)步驟中的非特異性吸附，降低背景。

8、底物溶液：

對(duì)于HRP：常用四甲基聯(lián)苯胺或3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺。

對(duì)于AP：常用對(duì)硝基苯磷酸酯。

9、終止液：

對(duì)于HRP-TMB：常用稀硫酸溶液。

對(duì)于AP-pNPP：常用氫氧化鈉溶液。用于終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定最終顏色。

10、板封膜： 在孵育步驟中覆蓋微孔板，防止蒸發(fā)和污染。

11、說(shuō)明書(shū)： 詳細(xì)的操作步驟、試劑保存條件、注意事項(xiàng)、預(yù)期結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法等。

樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織,剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

6. 樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

人27kDa熱休克蛋白ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人唾液酸乙酰酯酶(SIAE)ELISA試劑盒   英文名：Human SIAE ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人饑餓素/肥胖抑制素前激素原(GHRL)ELISA試劑盒   英文名：Human GHRL ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人后期角化被膜蛋白1A(LCE1A)ELISA試劑盒   英文名：Human LCE1A ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人脫氧胞苷激酶(DCK)ELISA試劑盒   英文名：Human DCK ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)蛋白3(TP53I3)ELISA試劑盒   英文名：Human TP53I3 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人殘留樣蛋白1(VGLL1)ELISA試劑盒   英文名：Human VGLL1 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人透明質(zhì)酸合酶2(HAS2)ELISA試劑盒   英文名：Human HAS2 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人叉頭框蛋白J1(FOXJ1)ELISA試劑盒   英文名：Human FOXJ1 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人外核苷三磷酸二磷酸水解酶3(ENTPD3)ELISA試劑盒   英文名：Human ENTPD3 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(COPT1)ELISA試劑盒   英文名：Human COPT1 ELISA Kit

心語(yǔ)檢測(cè)(XinYu BioDetect)   人序列相似家族19成員A5(FAM19A5)ELISA試劑盒   英文名：Human FAM19A5 ELISA Kit