實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人蛋白酪氨酸磷酸酶受體 O(PTPRO)水平。用純

化的人蛋白酪氨酸磷酸酶受體 O(PTPRO)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微

孔中依次加入蛋白酪氨酸磷酸酶受體 O(PTPRO)，再與 HRP 標(biāo)記的蛋白酪氨酸磷酸酶受體

O(PTPRO)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB

在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的

蛋白酪氨酸磷酸酶受體 O(PTPRO)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人蛋白酪氨酸磷酸酶受體 O(PTPRO)濃度。

操作步驟

1.

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

800pg/ml

5 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

400pg/ml

4 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

200pg/ml

3 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

100pg/ml

2 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50pg/ml

1 號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3

2.

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40

μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底

部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.

配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6.

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.

溫育：操作同 3。

8.

洗滌：操作同 5。

9.

顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯

色 10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液

后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。